ГЛАВА 7. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЭЛЕКТРОАКТИВИРОВАННЫХ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ АНОЛИТА ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДИСБАКТЕРИОЗА
Исходя из данных о высокой бактерицидной активности анолита мы решили проверить его бактерицидное действие на микрофлору организма. Интересно было изучить действие анолита в моделях - состояний, близких к болезням человека. Для этого была выбрана модель дисбактериоза ки- шечника и изучено влияние анолита на микрофлору кишечника (что являет- ся важным при пероральном введении препарата). Нормальная микрофлора кишечника представляет собой многокомпо- нентную экологическую систему, сложившуюся эволюционно в результате взаимодействия микроорганизмов и организма - хозяина. По современным представлениям, нормальная микрофлора ЖКТ подразделяется на индигенную и условно-патогенную. Индигенная микрофлора состоит из небольшого чис- ла рядов микроорганизмов, чье присутствие необходимо для нормального функционирования макроорганизма. В микробиоценозе млекопитающих - это, прежде всего, анаэробные микроорганизмы: Bifidum, Lactobacterium и в небольшом количестве ( до 1% от всех остальных) E.coli с нормальной ферментативной активностью. Последний представитель индигенной микрофлоры отнесен к этой группе на основании обнаружения его в фекалиях здоровых и огромной по- ложительной роли для организма хозяина. Во всех остальных биотопах он рассматривается в группе условно-патогенных бактерий (к которым по су- ществу и относится) и наличие его расценивается как отрицательный признак. Представители индигенной микрофлоры учатствуют в механизмах защи- ты организма от экзогенной и эндогенной инфекции, стимулируют работу иммуной системы, синтезируют ферменты и биологически активные вещест- ва, принимая тем самым участие в обменных процессах макроорганизма, выполняют детоксикационную функцию и многие другие. К группе факультативных бактерий, наличие которых в кишечнике расценивается как необязательное,и положительная роль которых для ор- ганизма пока неясна, относятся: эпидермальный и сапрофитный стафило- кокк, энтерококки, другие (кроме Е.coli) условно-патогенные энтеробак- терии, споровая анаэробная и факультативно-анаэробная микрофлора. Ее количество в норме ограничивается 102-104 кл/гр фекалий, кроме эн- терококков, количество которых в норме равно 106-107 кл/гр. Наиболее положительное влияние на функционирование макроорганизма оказывают би- фидум и лактобактерии. Они принимают участие в синтезе витаминов и незаменимых аминокислот, предотвращают чрезмерное размножение услов- но-патогенной микрофлоры. Лактобактерии обладают иммуномодулирующим действием. E.coli с нормальными ферментативными свойствами участвуют в про- цессах детоксикации, обмене холестерина и желчных кислот, синтезе ви- таминов. Несмотря на относительную устойчивость кишечного микробиоценоза, в нем могут возникать нарушения под действием различных, чаще экзоген- ных факторов. Состояние микробиоценоза кишечника, характеризующееся снижением количества индигенной микрофлоры и (или) повышением услов- но-патогенной, называется дисбактериозом. Дисбактериоз может возникать как самостоятельное заболевание, или быть следствием другого. Во вто- ром случае дисбактериоз оказывает отрицательное влияние на течение ос- новного заболевания, хронизирует его. Микробиоценоз толстого кишечника был изучен у 47 беспородных по- ловозрелых крыс, весом 200-300 гр. У всех животных был смоделирован алиментарный дисбактериоз кишечника, 10 составили контрольную группу, у 37 микробиоценоз кишечника исследовался через 4 и 14 дней после вве- дения анолита. Анолит получали на диафрагменном электролизере "Эсперо-1" на ос- нове 0,9% раствора NaCl. Параметры вводимого анолита: С а.х < 50 г/л; ОВП + 700 мВ; рН = 3,8 ед. Анолит вводился внутрижелудочно в количест- ве 2-3 мл 1 раз в день в течение 4 дней (10-15 мл на 1 кг веса). Пара- метры и количество анолита были подобраны опытным путем. Содержимое толстого кишечника взвешивали, готовили серию десятикратных разведений до 10-10 в фосфатном буфере, из каждого разведения осуществляли мерный высев на набор сред: эндо, кровяной агар, молочно-солевой агар, среда Сабуро, МРС-4 для лактобактерий, КАБ (для выделения анаэробов). Раз- личные микроорганизмы идентифицировали. Количество микроорганизмов вы- ражалось в lg от колониеобразующих единиц в 1 гр фекалий (lg /кое / гр). Индекс дисбактериоза рассчитывался как отношение условно-патоген- ных микроорганизмов к индигенным (в норме = 0,1). Полученные результа- ты представлены в таблице 7.1. У крыс контрольной группы имел место выраженный дисбактериоз. Он выражался в сниженном количестве бифидум и лактобактерий (в норме 11-12 в lg/кое/гр) и увеличении доли факультативной группы условно-па- тогенных микроорганизмов. Значительно выше нормы было содержание клеб- сиелл, споровой микрофлоры, энтерококков. Все это нашло отражение в индексе дисбактериоза (И.Д = 15,8 при норме И.Д. < 0,1). После 4 дней введения анолита содержание в толстом кишечнике индигенных микроорга- низмов повысилось на порядок за счет возрастания количества лактобак- терий. Доля условно-патогенных микроорганизмов уменьшалась за счет грамм-отрицательных бактерий. Исчезли клебсиеллы, псевдонады, гаф- нии, гемолитические кишечные палочки. Хотя появились E.coli лакто- за-негативные, осталось высоким содержание споровой палочки. В резуль- тате этих изменений индекс дисбактериоза почти нормализовался (И.Д. = 0,68). Повторный анализ через две недели показал, что индигенные микро- организмы остались почти на том же уровне, количество бифидум повыси- лось на 1,5 порядка, лактобактерии удерживались на том же уровне. Таблица 7.1. Микробиоценоз толстого кишечника крыс под влиянием АНОЛИТА -------------------------------T---------T------------T-------------- | Микроорганизмы | До |После введе-| После введе-| | | введения|ния анолита | ния анолита | | | анолита | 4 день | 14 день | L------------------------------+---------+------------+-------------- Bifidum 5,86+-0,5 3,15+-0,31 4,5 +-0,23 Lacctobacterium sp. 10,8+-0,62 11,7+-0,87 11,5+-0,65 E.coli 7,4+-0,24 5,7+-0,64 5,3+-0,71 Индигенные - всего:- 10,8+-0,61 11,72+-0,37 11,53+-0,72 E.coli (лактоза) 0 6,78+-0,2 0 E.coli (гемолиз +) 4,3+-0,34 0 5,6+-0,68 Streptococcus гр.Д 9,86+-0,6 0 7,85+-0,37 Streptococcus гр.Д(гемолиз+) 0 0 3,15+-0,4 Bacillus sp. 10.8+-0,72 11,5+-0,64 10,56+-0,37 Clostridium sp. 0 0 7,0+-0 Proteus omibilis 5,76+-0,54 5,6+-0,42 0 Hafniae sp. 3,0+-0,5 0 3,3+-0,54 Lersiniae sp. 0 6,3+-0,41 5,3+-0,6 Klebsiellae sp. 12,0+-0,63 0 0 Psevdomonae sp. 5,0+-0,4 0 0 Corynbacterium sp. 0 5,0+-0,34 0 Общее количество условно- патогенных 12,03+-0,74 11,55+-0,67 10.57+-0,68 Общее кол-во М.О. Индекс дисбактериоза 15,8 0,68 0,11 --------------------------------------------------------------------- Количество условно-патогенных микроорганизмов снизилось еще на порядок за счет грамм-отрицательной микрофлоры, по-прежнему в высоком титре высевалась споровая палочка.Содержание энтерококков почти соот- ветствовало норме. Индекс дисбактериоза отражает нормальное состояние микробиоценоза кишечника (И.Д. =0,11). Из всего ранее изложенного следует, что введение в ЖКТ анолита снижает содержание условно-патогенных грамм-отрицательных микроорга- низмов и увеличивает количество лактобактерий. На споровую грамм-поло- жительную микрофлору анолит действия не оказывает. Многочисленными экспериментами нами было выяснено, что анолит оказывает избирательное антибактериальное действие при определенных параметрах, которые сос- тавляли С а.х.< 50г/л, ОВП от плюс 600 мВ до плюс 900 мВ, рН от 4 ед. до 3,5 ед. При повышении параметров анолита до максимальных, он терял изби- рательную активность , вырезая всю микрофлору кишечника за исключением споровой грамм-положительной микрофлоры. Избирательность антибактериального действия анолита при опреде- ленных параметрах может быть использована для селективной деконтамина- ции кишечника при увеличении в фекальной микрофлоре доли условно-пато- генных энтеробактерий. Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод о том, что анолит имеет целый ряд преимуществ по сравнению с применяемыми для этой цели антибиотиками, так как не существует антибиотиков с достаточно избира- тельным спектром действия и вырезая условно-патогенную группу бакте- рий, антибиотик повреждает индигенную флору. Бактерицидная активность анолита зависит от его параметров, поэ- тому, зная или моделируя антибактериальное действие анолита на конк- ретные штаммы микроорганизмов in vitro, можно предсказать бактерицид- ную активность анолита на объектах in vivo. Избирательная антибактери- альная активность анолита в зависимости от его параметров была с успе- хом использована в клинических условиях.
![]() Дом. |
![]() Главная |
![]() Отзывы |