ГЛАВА 7.  ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
               ЭЛЕКТРОАКТИВИРОВАННЫХ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ АНОЛИТА
               ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДИСБАКТЕРИОЗА

     Исходя из данных о высокой бактерицидной  активности  анолита  мы решили  проверить  его бактерицидное действие на микрофлору организма. Интересно было изучить действие анолита в моделях - состояний, близких к  болезням человека.  Для этого была выбрана модель дисбактериоза ки- шечника и изучено влияние анолита на микрофлору кишечника (что являет- ся важным при пероральном введении препарата).      Нормальная микрофлора кишечника  представляет  собой  многокомпо- нентную  экологическую  систему,  сложившуюся эволюционно в результате взаимодействия микроорганизмов и организма - хозяина.  По  современным представлениям, нормальная микрофлора ЖКТ подразделяется на индигенную и условно-патогенную. Индигенная микрофлора состоит из небольшого чис- ла  рядов микроорганизмов,  чье присутствие необходимо для нормального функционирования макроорганизма. В микробиоценозе млекопитающих - это, прежде всего,  анаэробные микроорганизмы:  Bifidum, Lactobacterium и в небольшом количестве ( до 1%  от всех остальных) E.coli  с  нормальной ферментативной активностью.      Последний представитель  индигенной  микрофлоры  отнесен  к  этой группе на основании обнаружения его в фекалиях здоровых и огромной по- ложительной роли для организма хозяина.  Во всех остальных биотопах он рассматривается в группе условно-патогенных бактерий (к которым по су- ществу  и  относится)  и  наличие  его расценивается как отрицательный признак.      Представители индигенной микрофлоры учатствуют в механизмах защи- ты  организма от экзогенной и эндогенной инфекции,  стимулируют работу иммуной системы,  синтезируют ферменты и биологически активные вещест- ва,  принимая  тем  самым участие в обменных процессах макроорганизма, выполняют детоксикационную функцию и многие другие.      К группе факультативных бактерий,  наличие  которых  в  кишечнике расценивается  как необязательное,и положительная роль которых для ор- ганизма пока неясна,  относятся:  эпидермальный и сапрофитный стафило- кокк, энтерококки, другие (кроме Е.coli) условно-патогенные энтеробак- терии,  споровая анаэробная и факультативно-анаэробная микрофлора.  Ее количество в норме ограничивается 102-104 кл/гр фекалий,  кроме эн- терококков,  количество которых в норме равно 106-107 кл/гр.  Наиболее положительное влияние на функционирование макроорганизма оказывают би- фидум и лактобактерии. Они принимают участие в синтезе  витаминов и незаменимых аминокислот, предотвращают чрезмерное размножение услов- но-патогенной микрофлоры.  Лактобактерии  обладают  иммуномодулирующим действием.      E.coli с  нормальными ферментативными свойствами участвуют в про- цессах детоксикации,  обмене холестерина и желчных кислот, синтезе ви- таминов.      Несмотря на относительную устойчивость кишечного  микробиоценоза, в нем могут возникать нарушения под действием различных, чаще экзоген- ных факторов.  Состояние микробиоценоза  кишечника,  характеризующееся снижением  количества  индигенной микрофлоры и (или) повышением услов- но-патогенной, называется дисбактериозом. Дисбактериоз может возникать как самостоятельное заболевание,  или быть следствием другого. Во вто- ром случае дисбактериоз оказывает отрицательное влияние на течение ос- новного заболевания, хронизирует его.      Микробиоценоз толстого  кишечника был изучен у 47 беспородных по- ловозрелых крыс,  весом 200-300 гр.  У всех животных был  смоделирован алиментарный дисбактериоз кишечника,  10 составили контрольную группу, у 37 микробиоценоз кишечника исследовался через 4 и 14 дней после вве- дения анолита.      Анолит получали на диафрагменном электролизере "Эсперо-1" на ос- нове 0,9%  раствора NaCl. Параметры вводимого анолита: С а.х < 50 г/л; ОВП + 700 мВ; рН = 3,8 ед. Анолит вводился внутрижелудочно в количест- ве 2-3 мл 1 раз в день в течение 4 дней (10-15 мл на 1 кг веса). Пара- метры  и  количество анолита были подобраны опытным путем.  Содержимое толстого кишечника взвешивали, готовили серию десятикратных разведений до 10-10  в фосфатном буфере,  из каждого разведения осуществляли мерный высев на набор сред:  эндо, кровяной агар, молочно-солевой агар, среда Сабуро,  МРС-4 для лактобактерий,  КАБ (для выделения анаэробов). Раз- личные микроорганизмы идентифицировали. Количество микроорганизмов вы- ражалось  в  lg  от колониеобразующих единиц в 1 гр фекалий (lg /кое / гр). Индекс дисбактериоза рассчитывался как отношение условно-патоген- ных микроорганизмов к индигенным (в норме = 0,1). Полученные результа- ты представлены в таблице 7.1.      У крыс контрольной группы имел место выраженный дисбактериоз.  Он выражался  в  сниженном  количестве  бифидум  и лактобактерий (в норме 11-12 в lg/кое/гр) и увеличении доли факультативной группы условно-па- тогенных микроорганизмов. Значительно выше нормы было содержание клеб- сиелл,  споровой микрофлоры,  энтерококков.  Все это нашло отражение в индексе дисбактериоза (И.Д = 15,8 при норме И.Д.  < 0,1). После 4 дней введения анолита содержание в толстом кишечнике индигенных  микроорга- низмов  повысилось на порядок за счет возрастания количества лактобак- терий.  Доля условно-патогенных микроорганизмов  уменьшалась  за  счет грамм-отрицательных бактерий.  Исчезли клебсиеллы,  псевдонады, гаф- нии,  гемолитические кишечные палочки.  Хотя появились  E.coli  лакто- за-негативные, осталось высоким содержание споровой палочки. В резуль- тате этих изменений индекс дисбактериоза почти нормализовался (И.Д.  = 0,68).      Повторный анализ через две недели показал,  что индигенные микро- организмы остались почти на том же уровне,  количество бифидум повыси- лось на 1,5 порядка, лактобактерии удерживались на том же уровне.                                                  Таблица 7.1.              Микробиоценоз толстого кишечника крыс                      под влиянием АНОЛИТА -------------------------------T---------T------------T-------------- |      Микроорганизмы          |   До    |После введе-| После введе-| |                              | введения|ния анолита | ния анолита | |                              | анолита | 4 день     |   14 день   | L------------------------------+---------+------------+--------------        Bifidum                  5,86+-0,5   3,15+-0,31   4,5 +-0,23        Lacctobacterium sp.     10,8+-0,62   11,7+-0,87   11,5+-0,65        E.coli                   7,4+-0,24    5,7+-0,64    5,3+-0,71        Индигенные - всего:-    10,8+-0,61  11,72+-0,37  11,53+-0,72        E.coli (лактоза)             0      6,78+-0,2         0        E.coli (гемолиз +)       4,3+-0,34       0         5,6+-0,68        Streptococcus гр.Д       9,86+-0,6       0        7,85+-0,37        Streptococcus гр.Д(гемолиз+) 0           0         3,15+-0,4        Bacillus sp.            10.8+-0,72   11,5+-0,64  10,56+-0,37        Clostridium sp.              0           0            7,0+-0        Proteus omibilis        5,76+-0,54    5,6+-0,42       0        Hafniae sp.               3,0+-0,5       0         3,3+-0,54        Lersiniae sp.                0        6,3+-0,41     5,3+-0,6        Klebsiellae sp.         12,0+-0,63       0            0        Psevdomonae sp.           5,0+-0,4       0            0        Corynbacterium sp.           0        5,0+-0,34       0        Общее количество условно-        патогенных             12,03+-0,74  11,55+-0,67  10.57+-0,68        Общее кол-во М.О.        Индекс дисбактериоза       15,8         0,68         0,11 ---------------------------------------------------------------------      Количество условно-патогенных микроорганизмов  снизилось  еще  на порядок за счет грамм-отрицательной микрофлоры,  по-прежнему в высоком титре высевалась споровая палочка.Содержание энтерококков почти  соот- ветствовало норме.  Индекс дисбактериоза отражает нормальное состояние микробиоценоза кишечника (И.Д. =0,11).      Из всего  ранее  изложенного следует,  что введение в ЖКТ анолита снижает содержание условно-патогенных  грамм-отрицательных  микроорга- низмов и увеличивает количество лактобактерий. На споровую грамм-поло- жительную микрофлору анолит  действия  не  оказывает.  Многочисленными экспериментами нами было выяснено,  что анолит оказывает избирательное антибактериальное действие при определенных параметрах,  которые  сос- тавляли С а.х.< 50г/л,  ОВП от плюс 600 мВ до плюс 900 мВ, рН от 4 ед. до 3,5 ед.      При повышении параметров анолита до максимальных,  он терял изби- рательную активность , вырезая всю микрофлору кишечника за исключением споровой грамм-положительной микрофлоры.      Избирательность антибактериального действия анолита  при  опреде- ленных параметрах может быть использована для селективной деконтамина- ции кишечника при увеличении в фекальной микрофлоре доли условно-пато- генных энтеробактерий.      Исходя из вышеизложенного,  можно сделать вывод о том, что анолит имеет  целый ряд преимуществ по сравнению с применяемыми для этой цели антибиотиками, так как не существует антибиотиков с достаточно избира- тельным  спектром  действия и вырезая условно-патогенную группу бакте- рий, антибиотик повреждает индигенную флору.      Бактерицидная активность анолита зависит от его параметров,  поэ- тому,  зная  или моделируя антибактериальное действие анолита на конк- ретные штаммы микроорганизмов in vitro,  можно предсказать бактерицид- ную активность анолита на объектах in vivo. Избирательная антибактери- альная активность анолита в зависимости от его параметров была с успе- хом использована в клинических условиях.


Дом.

Главная

Отзывы