НИЦ "ИКАР" - 33 года с вами
skip

 

УДК 576.8; 639.381; 541.13

Бактерицидные свойства анолита нейтрального типа АНК в отношении микроорганизмов, санитарно-значимых для рыбной отрасли

Л.Б Мухина, Н.В. Дужик, Е.Ю. Дмитриева, Э.Б. Альтшуль

Лаборатория микробиологии института ГИПРОРЫБФЛОТ.


Обсуждается эффективность бактерицидных свойств анолита нейтрального католита для рыбной отрасли.

Анолит нейтральный католит, бактериальные культуры, рабочая поверхность, рыбоперерабатывающая отрасль.


Одной из актуальных проблем рыбной отрасли является поиск эффективных дезинфицирующих средств, обладающих низкой токсичностью, пониженными аллергенными свойствами, легко удаляющихся с обрабатываемой поверхности. Ассортимент новых дезинфицирующих препаратов, разрешенных к применению в пищевой промышленности, не так уж широк. В последнее время в отраслях народного хозяйства находит применение в качестве дезинфицирующего средства электрохимически активированные растворы, содержащие активный хлор и свободные радикалы (например, анолит нейтральный католит – АНК).

В связи с тем, что в рыбной отрасли АНК пока не нашел достаточно широкого применения, целью данного исследования является:

  • апробировать бактерицидные свойства АНК в отношении санитарно-значимых бактерий, как на чистых культурах, так и в присутствии белковой нагрузки, имитирующей загрязнения белкового происхождения (кровь, белковые остатки от рыбы, слизь и др.);
  • определить минимальное содержание активного хлора в АНК, обладающее бактерицидным эффектом по отношению к санитарно-значимым бактериям.

Бактерицидные свойства анолита изучали на четырех санитарно-значимых видах бактерий. В качестве тест-микроорганизмов использовали следующие штаммы: Enterobacter cloaceae, Staphylococcus aureus 906, Bacillus cereus ВКМ 687, Pseudomonas fluorescens. Использовали трехсуточные бактериальные культуры, которые выращивали на скошенном рыбо-пептонном агаре (РПА). Петлей засевали 5 мл рыбо-пептонного бульона (РПБ) и помещали в термостат на 72 часа, при температуре 30оС (Bacillus cereus и Ps.fluorescens) и 37оС (E. сloaceae и St. aureus).

В качестве тест-поверхности использовали материалы, широко применяемые в рыбоперерабатывающей отрасли: метлахскую плитку, кафельную плитку, нержавеющую сталь, пластик.

К 1 мл трехсуточной бульонной культуры добавляли 9 мл физиологического раствора. 2 мл этой суспензии наносили на квадраты 7,5×7,5 см2. Высушивали досуха без подогревания (~ 2 часа). Обработку поверхности проводили распределением 2 мл АНК на квадрат. После инкубации при комнатной температуре в течение 40 минут влажную обработанную поверхность протирали двумя стерильными ватными тампонами, помещали их в 20 мл физиологического раствора с 1 мл 0,1 н гипосульфита и встряхивали 1-2 мин. Делали разведения и осуществляли высев на поверхность РПА.

В опытах с белковой нагрузкой к 1 мл суспензии бактерий добавляли вместо физиологического раствора 9 мл РПБ.

Эффективность бактерицидного действия АНК оценивали, сравнивая численность жизнеспособных клеток в опыте и контроле. Считали, что положительный эффект должен сопровождаться понижением численности жизнеспособных клеток в опыте по отношению к контролю не менее чем на два порядка.

Из представителей колиформных бактерий на рыбе и рыбной продукции, чаще всего встречаются представители рода Enterobacter. Они являются не только показателями загрязнений сточными водами, но и осложняют ряд заболеваний у рыб. Именно поэтому в данных исследования по бактерицидному действию АНК, мы использовали штамм Enterobacter cloaceae, выделенный нами из рыбной продукции. Эффективность бактерицидного воздействия АНК на трехсуточную культуру Enterobacter cloaceae представлена в табл. 1.

Таблица 1.

Эффективность бактерицидного воздействия АНК по отношению к культуре E. cloaceae* на метлахской плитке после 40 минутной экспозиции.

АНК Cl- мг/л

Материал

Количество жизнеспособных клеток.

Нанесено, КОЕ/мл предполагаемого смыва

Смыто без обработки, КОЕ/мл

Смыто после обработки, КОЕ/мл

250

Метлахская плитка

3,5 ´ 106

2,6 ´ 104

(без белка)

4,2 ´ 102

2,5 ´ 105

(с белком)

1,6 ´ 105

* Возраст культуры - 72 часа, при 37оС


Из табл. 1 видно, что численность жизнеспособных клеток E. cloaceae значительно снижается (на три порядка) уже при нанесении и высушивании на тестируемом материале (метлахская плитка). Бактерицидный эффект АНК без белковой нагрузки достаточно большой, снижение численности жизнеспособных клеток составляет два порядка. В присутствии белковой нагрузки, бактерицидный эффект АНК при концентрации активного хлора 250 мг/л - незначителен, и составляет - 35% от исходной численности бактерий.

Таким образом, можно заключить, что при обеззараживании от БГКП поверхностей, представляющих собой метлахскую плитку, следует использовать АНК с концентрацией активного хлора от 250 мг/л и выше.

Представители рода Pseudomonas - одни из самых распространенных в воде, на рыбе и рыбных продуктах. В пределах рода наиболее часто встречается Pseudomonas fluorescens. Именно этот вид, был использован для изучения бактерицидной эффективности АНК. Результаты изучения воздействия АНК на трехсуточную культуру Ps. fluorescens в присутствии белкового загрязнения, представлены в табл. 2.

Таблица 2.

Эффективность бактерицидного воздействия АНК по отношению к культуре Ps. fluorescens* на метлахской плитке после 40 минутной экспозиции.

АНК Cl- мг/л

Материал

Количество жизнеспособных клеток.

Нанесено, КОЕ/мл предполагаемого смыва

Смыто без

обработки, КОЕ/мл

Смыто после

обработки, КОЕ/мл

350

метлахская плитка

3,2 ´ 108

2,4 ´ 106 (с белком) < 5

* Возраст культуры - 72 часа при 30 0С.


Из табл. 2 видно, что численность жизнеспособных клеток бактериальной суспензии Ps. fluorescens, при нанесении и высушивании на метлахской плитке снижается на два порядка. Бактерицидный эффект АНК (350Cl-мл/л) – значительный и составляет шесть порядков от исходной численности бактерий. Таким образом, можно заключить, что при обеззараживании от псевдомонад поверхности, представляющие собой метлахскую плитку, в присутствии белкового загрязнения можно рекомендовать АНК с концентрацией 350 Cl¯мл/л.


Золотистый стафилококк. В качестве тест-штамма, был взят Staphylococcus aureus штамм 906, рекомендуемый нормативными документами для оценки эффективности дезинфицирующих средств.

Эффект бактерицидного воздействия АНК по отношению к St.aureus шт. 906 на различных поверхностях представлен в табл. 3.

Из представленных результатов видно, что численность жизнеспособных клеток бактериальной суспензии St. aureus снижается уже при нанесении на тестируемый материал и высушивании ее на поверхности: на метлахской плитке - в два раза, на пластике - на 2 порядка, на нержавеющей стали - на 1-3 порядка.

Бактерицидное воздействие АНК (250 Cl¯мг/л) в опытах без белковой нагрузки на поверхности метлахской плитки приводит к снижению численности на два порядка. В присутствии белковой нагрузки бактерицидный эффект АНК закономерно снижается. На метлахской плитке исходная численность бактерий после обработки АНК (250 Cl¯мг/л) снижается на один порядок, что свидетельствует о слабом эффекте данной концентрации активного хлора.
При концентрации АНК 400-500 Cl¯мл/л исходная численность бактерий на пластике снижается на 4 порядка; на нержавеющей стали - на 2-5 порядков.

Таким образом, можно сделать вывод, что при использовании АНК для обеззараживания рабочей поверхности и оборудования с возможным высоким загрязнением St.aureus, целесообразно использовать АНК с концентрациями активного хлора 400-500 мг/л.

Таблица 3.

Эффективность бактерицидного воздействия АНК по отношению к St. Aureus шт. 906 на поверхности различных материалов после 40 минутной экспозиции

АНК Cl- мг/л

Материал

Количество жизнеспособных клеток

Нанесено, КОЕ/мл предполагаемого смыва

Смыто без

обработки, КОЕ/мл

Смыто после обработки, КОЕ/мл

250

метлахская плитка

3,3 ´ 107

1,4 ´ 107

(без белка)

0,9 ´ 105

1,8 ´ 107

(с белком)

7,5 ´ 106

370

пластик

2,4 ´ 107

3,1 ´ 105

(с белком)

3,5 ´ 101

370

нержавеющая сталь

3,6 ´ 107

1,6 ´ 106

(с белком)

< 10

500

2,2 ´ 107

1,4 ´ 104

(с белком)

3,6 ´ 102

* Возраст культуры - 3 суток, при 30оС.


В качестве тест-объекта образующих эндоспоры бактерий, был выбран возбудитель пищевых токсикоинфекций, факультативно-анаэробная бацилла - Bacillus cereus ВКМ 687. В работе использовали смесь вегетативных клеток и спор – 32% (трехсуточная культура, выращенная при 370 С).

Эффективность бактерицидного воздействия АНК по отношению к В.cereus ВКМ 687 на различных поверхностях представлены в табл. 4.

Таблица 4.

Эффективность бактерицидного воздействия АНК по отношению к В. cereus ВКМ 687 на поверхности различных материалов после 40 минутной экспозиции.

АНК Cl¯ мг/л

Материал

Количество жизнеспособных клеток

Нанесено, КОЕ/мл предполагаемого смыва

Смыто без

обработки, КОЕ/мл

Смыто после

обработки, КОЕ/мл

250

Метлахская плитка

2,8´ 106

3,0 ´ 105

(без белка)

1,0 ´ 102

4,2 ´ 105

(с белком)

1,0 ´ 104

400

кафельная плитка

1,4 ´ 106

2,6 ´ 105

(с белком)

1,7 ´ 102

400

нержавеющая сталь

8,4 ´ 105

2,5 ´ 103

(с белком)

2,2 ´ 103

450

2,2 ´ 106

1,8 ´ 103

(с белком)

1,3 ´ 103


Из представленных результатов видно, что численность жизнеспособных клеток и спор бактериальной суспензии В. cereus снижается, уже при нанесении и высушивании на тестируемом материале: на метлахской плитке – на 1 порядок, на кафельной плитке – на 3 порядка, на нержавеющей стали – на 2-3 порядка.

Бактерицидный эффект АНК (250 Cl¯ мг/л) без белковой нагрузки на метлахской плитке – значительный и сопровождается снижением численности в опыте на 3 порядка. В присутствии белковой нагрузки бактерицидная эффективность АНК снижается. Так исходная численность бактерий после обработки АНК на метлахской плитке снижается в 40 раз, на кафельной плитке в 10 раз. На нержавеющей стали бактерицидный эффект АНК- минимальный, при максимальной исходной концентрации активного хлора 400 – 450 мг/л он вызывает снижение численности на 10-25%..

Таким образом, можно сделать вывод, что при использовании АНК для обеззараживания рабочих поверхностей и оборудования с возможным загрязнением вегетативными клетками и спорами бацилл можно рекомендовать АНК со следующими концентрациями активного хлора:

  • для обработки метлахской и кафельной плитки – 250-400 Cl¯мг/л;
  • для обеззараживания нержавеющей стали, рекомендуем применять не АНК, а другие более эффективные дезинфицирующие средства.

Можно констатировать, что АНК с концентрацией 250-400Cl- мг/л является высоко эффективным для обеззараживания рабочих поверхностей (метлахская, керамическая плитка, нержавеющая сталь, пластик) против БГКП, псевдомонад, золотистого стафилококка, вегетативных клеток спорообразующих бактерий и может быть с успехом использован для этой цели в рыбной отрасли. Для обеззараживания рабочих поверхностей в случае загрязнения спорами бактерий АНК (400-500Cl- мг/л) оказывается малоэффективен без предварительной обработки рабочей поверхности моющими средствами, направленной на удаление белкового загрязнения.