НИЦ "ИКАР" - 33 года с вами
skip

 

УДК 541.13; 576.72

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИ АКТИВИРОВАННЫХ РАСТВОРОВ ДЛЯ ВРЕМЕННОЙ КОНСЕРВАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ

А.Е. Мосежный, А.О. Ружицкий, А.Ю. Маятников

Научно-производственный центр "Гидробиос"

Федерального управления "Медбиоэкстрем" при Минздраве России, г. Москва


Рассматривается возможность применения анолита в качестве фиксатора животных тканей с целью повышения стабилизирующего эффекта гистологических фиксаторов.

   Анолит, гистологические фиксаторы.


В настоящее время актуальной является проблема временной консервации биологических структур для проведения последующих гистологических исследований. Применяемые в для этих целей растворы формалина не всегда являются легко доступными, особенно, во время чрезвычайных ситуаций. Кроме этого формалин при его значительных концентрациях в воздухе, является токсичным. Вместе с тем, электрохимически активированные растворы, благодаря высоким концентрациям активных соединений хлора, могут оказывать стабилизирующий эффект на биоткани в процессе поствитальной деградации последних.

В работе были использованы крысы обоего пола породы Vistar, массой 200 - 220 грамм. Через 2 часа после забоя животных внутрибрюшинным введением гексенала, брюшная и грудная полости промывались опытными растворами. Контролем служили животные без обработки.

Животные были разбиты на 5 групп: К - интактный контроль; Ф - обработка 1,5% формалином; АФ - обработка 1,5% формалином с нейтральным анолитом; А - обработка нейтральным анолитом; КА - обработка кислым анолитом.

Начиная со второго часа после обработки, животных вскрывали и отбирали для исследования образцы печени и сердца для биохимических и морфологических исследований.

В результате проведенных исследований получены следующие данные:

Выход свободного белка незначительно отличается в различных группах в сердечной мышце, в то же время, в клетках печени, этот процесс значительно снижается при обработке формалином и формалином с нейтральным анолитом. При сравнении процессов деградации липидов в различных группах оказалось, что для сердечной мышцы максимальная скорость разрушения липидов в контрольной группе достигается через 18 часов после гибели животного, во всех опытных группах время максимальной активности перекисного окисления сдвинуто во времени, а при обработке кислым анолитом это время превышало срок наблюдения. Аналогичная картина наблюдалась и в ткани печени, исключение составляет лишь группа, обработанная анолитом с формалином.

Общий гистологический анализ показал, что в контрольной группе через 2 часа после смерти в соединительной ткани определяется большое количество ядер на разной стадии кариопикнотических изменений. Ядра кардиомиоцитов сохранны. В цитоплазме кардиомиоцитов отмечается различная степень плазмокоагуляции. В последующие часы эти изменения нарастают, через 4 часа определяется заметная эозинофилия цитоплазмы. признаки плазморексиса. Через 6 часов цитоплазма уже всех кардиомиоцитов находится в состоянии плазморексиса. Через 12 часов большая часть ядер (за исключением небольшого процента ядер кардиомиоцитов) мышечных клеток и соединительной ткани находится в состоянии кариопикноза и, частично, кариорексиса. В цитоплазме всех кардиомиоцитов в это время определяются плазмокоагуляция и плазморексис. Примерно в 1/3 кардиомиоцитов определяется краевой плазмолиз кардиомиоцитов. Через 24 часа и в последующие сроки нарастает число ядер в состоянии кариопикноза, растет процент кардиомиоцитов, подверженных плазмолизу и степень их расплавления. Через 48 часов определяется грубый кариорексис (хотя небольшая часть ядер кардиомиоцитов еще сохранна), плазморексис, плазмолиз. Соединительная ткань практически полностью разрушена.

В группе Ф через 12 часов картина соответствует таковой в группе К на том же сроке. Последующие изменения также сходны с группой К.

В группе КА через 12 часов картина соответствует таковой в группах К и Ф на том же сроке. Последующие изменения также сходны с этими группами, но степень плазмолиза меньше.

В группе А признаки гибели клеток значительно менее выражены, чем в предыдущих группах. Так, даже через 12 часов после смерти в большей части ядер клеток отсутствуют признаки пикноза, также как и признаки плазмокоагуляции и плазморексиса в цитоплазме. В то же время во многих кардиомиоцитах определяется краевой плазмолиз. Через 24 часа нарастает процент пикнотических ядер за счет клеток соединительной ткани. Ядра кардиомиоцитов сохранны. В цитоплазме кардиомиоцитов отмечается нарастание плазмолиза.

В группе АФ картина сходна с таковой в группе А, но признаки коа-гуляционного некроза несколько более выражены. Так, через 12 и 24 часа после смерти имеется небольшой процент ядер с пикнотическими изменениями, а в небольшой части кардиомиоцитов отмечаются признаки плазмокоагуляции и плазморексиса. Через 48 часов определяется грубый плазмолиз всех кардиомиоцитов, однако, признаки плазмокоагуляции и плазморексиса так и не проявляются, а большая часть ядер остается сохранной.

Таким образом, в результате морфологических исследований выявлены достоверные различия в степени и характере посмертных изменений стенки (сердца животных разных экспериментальных групп. Посмертные изменения относительно слабее выражены в группе АФ и, особенно, группе А по сравнению с группами К, Ф и КА. Среди последних трех групп наименее выражены посмертные изменения в группе КА, хотя характер посмертных изменений больше сходен с таковыми в группах К и Ф, чем А и Аф.

Наличие раннего плазмолиза кардиомиоцитов в группах А и АФ при отсутствии признаков плазмокоагуляции и плазморексиса может свидетельствовать о значительно более высокой "обводненности" ткани в этих группах и дистрофии не гиалинового (как в сериях К, Ф и КА), а гидропического типа. Возможно этим же объясняется и необычная базофилия цитоплазмы в кардиомиоцитах групп А и АФ, хотя при этом необходимо исключить кислый характер среды, пропитывающего раствора.